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Blots occidentaux Protocoles

Blots occidentaux Protocoles


A Western blots sont un type de transfert de protéine qui est utilisée dans le domaine médical, les laboratoires de biologie et d'autres disciplines scientifiques sur une base quotidienne. Western blots, lorsqu'elle est effectuée correctement, sont un moyen d'étudier l'expression des protéines dans des échantillons de tissus. Car il peut y avoir des différences dans les paramètres de chaque échantillon, il existe un certain nombre de protocoles qui doivent être suivies afin d'obtenir des résultats précis.

Exécution Washes

Après incubation des membranes dans les solutions d'anticorps pour la quantité appropriée de temps, qui varie en fonction de la solution d'anticorps est utilisé, EnCor Biotechnology affirme que la membrane doit être soumis à trois lavages à température ambiante dans du TBS. TBS est une solution qui a un pH de maquillage et spécifique pour le lavage. La membrane doit être lavée entre chaque introduction d'une nouvelle solution d'anticorps.

Préparation Mélange Coloration

Selon WesternBlotting.org, la préparation du mélange de coloration immédiatement avant de l'appliquer à l'élément permettra d'atteindre les meilleurs résultats. Il existe plusieurs types de solutions de coloration, dont certains peuvent être achetés et dont certains doivent être mélangés dans le laboratoire. Chimiluminescence coloration, selon EnCor Biotechnology, fournit les informations les plus par tache, mais est aussi le plus cher et nécessite une chambre noire pour le développement. Peroxydase de raifort Coloration et phosphatase alcaline blot d'autres options pour la coloration. Quelle que soit la méthode utilisée, la préparation du mélange juste avant l'utilisation est essentielle.

En utilisant un tampon

Après avoir appliqué la solution de coloration choisie, l'utilisation d'une mémoire tampon est la clé. Dans chimioluminescence coloration, l'application d'un acétate au-dessus de la solution de coloration est le protocole, selon WesternBlotting.org. Peroxydase de raifort Staining nécessite l'utilisation d'un tampon d'acétate d'ammonium afin d'obtenir le produit de coloration brune. Le tampon utilisé dans la phosphatase alcaline blot, qui devrait créer un produit de coloration pourpre, est plus compliqué à faire et peut être acheté déjà fait.